Inhaltszusammenfassung:
G-Proteine nehmen eine zentrale Rolle in der interzellulären Kommunikation im menschlichen Körper ein. Die Funktion dieser Kommunikationsmechanismen ist von besonderem wissenschaftlichen als auch medizinischem Interesse. In dieser Arbeit wurde die Rolle von Gαi3 in Thrombozyten mit Hilfe von Mäusen mit Plättchen-spezifischer Gnai3-, globaler Gnai3-, Plättchen-spezifischer Gnai2- und Gnai2/i3-Defizienz, sowie korrespondierenden Kontrolltieren untersucht.
Zunächst wurde die Expression der Oberflächenproteine GPV GPVI GPIX, α5 und β3 auf ruhenden Thrombozyten analysiert. Um den Grad der Aktivierung der Thrombozyten zu bestimmen, wurde der Anstieg der CD62P-Expression und JON/A-Bindung nach Aktivierung mit verschiedenen Substanzen (ADP, CRP, Thrombin und U46619) betrachtet. Das Mitochondriale Membranpotential ist der grundlegende Schlüssel für die Energiegewinnung in der Zelle und wurde mit dem Farbstoff TMRE, der Änderungen dieses Potentials anzeigt, detektiert. Je nach Aktivierungsgrad gehen die Thrombozyten unterschiedlich schnell in den Zustand des geregelten Zelltods. AnnexinV fungiert hierbei als Apoptosemarker, der an externalisiertes Phosphatidylserin bindet. Zuletzt wurde noch die Komplexbildung zwischen Gnai-defizienten Thrombozyten und neutrophilen Granulozyten nach Aktivierung bestimmt.
Beim Betrachten der Expression der Oberflächenproteine in Ruhe konnten keine Unterschiede zwischen Thrombozyten mit und ohne Gnai2-, Gnai3- oder Gnai2/i3-Defizienz festgestellt werden. Bei einer Gαi2-Defizienz ist eine geringere CD62P- und JON/A-Bindung nach Aktivierung mit ADP zu registrieren. Nach CRP- und Thrombin-Aktivierung konnten in Gnai3-defizienten Thrombozyten ebenfalls geringere Mengen an aktiviertem αIIbβ3 festgestellt werden. Bei der Untersuchung des mitochondrialen Membranpotentials wurden keinerlei Auswirkungen der Gnai2- und/oder Gnai3-Defizienz registriert. Bei der Einleitung der Apoptose, zeigte eine Gnai3-Defizienz einen protektiven Effekt. Die Komplexbildung zwischen neutrophilen Granulozyten und Thrombozyten zeigte nur bei Gnai2-Defizienz der Thrombozyten eine geringere Anzahl nach CRP-Aktivierung.
