Isolierung und Analyse von HLA-Klasse-I-Liganden aus soliden Tumoren und Tumorzellinien

Abstract

Das Projekt, in das die vorliegende Arbeit eingebunden ist, beschäftigt sich schon seit Jahren mit der Identifizierung von tumorspezifischen MHC-Klasse-I-Liganden für möglichst viele HLA-Allele. Diese Epitope sollen in Anschlußprojekten in der spezifischen Immuntherapie eingesetzt werden. Der klassische Weg für die CTL-Epitop-Identifizierung geht primär über das Etablieren von CTL-Klonen gegen Tumorzellinien und später wird versucht, das erkannte Epitop zu identifizieren. Hier wird eine Methode benutzt, die T-Zell-unabhängig arbeitet. Sie verbindet verschiedene Verfahren:

· Epitopvorhersage durch Peptidmotive

· Peptidextraktion

· HPLC–massenspektrometrische-Analyse.

CD8+ T lymphocytes recognize their antigens as MHC-class-I-associated peptides. Our T cell independent approach for the identification of peptides derived from tumor gene products combines several methods:

· epitope prediction using peptide motifs

· immunoprecipitation of MHC-peptide complexes followed by acid extraction of peptides from gastrointestinal tumors or tumor cell lines

· analysis by nanocapillary HPLC (high performance liquid chromatography) mass spectrometry.

The aim is the characterization of new tumor-associated epitopes from gastrointestinal tumor tissue for different HLA-alleles. Such MHC-I-restricted peptides might be used for specific immune therapy employing tumor-directed cytotoxic T lymphocytes that lyse tumor cells presenting the newly characterized peptides.