Die Rolle von AP-2alpha bei der Melanomentstehung und Progression

Abstract

Der Transkriptionsfaktor AP-2alpha spielt eine entscheidende Rolle bei der Regulation der Expression von verschiedenen Genen, die für das Wachstum und die Progression des malignen Melanoms wichtig sind. Das Ziel der vorliegenden Arbeit bestand in der Untersuchung des Expressionsprofils von AP-2alpha in der Tumorprogression des malignen Melanoms. Die AP-2alpha-Expression wurde einerseits an Zelllinien analysiert, die von Melanozyten über melanozytäre Nävi, von Melanomen der radialen und vertikalen Wachstumsphase, von metastasierten Melanomen und einigen anderen Tumorzelllinien sowie von normalem Gewebe etabliert worden sind. Andererseits wurde die Expression von AP-2alpha auf verschiedenen Ebenen untersucht, dass bedeutet auf DNA-, RNA- und Proteinebene. Hierzu wurden die Methoden der PCR, des Northern Blottings, des Western Blottings und der Immunhistologie in Verbindung mit der konfokalen Laserscanningmikroskopie angewandt. In situ konnte mit Hilfe von Immunhistologie und konfokaler Laserscanningmikroskopie eine deutliche Herunterregulation der AP-2alpha Expression im Verlauf der Melanomprogression gezeigt werden. Dabei konnte eine Verschiebung der Lokalisation des AP-2alpha Proteins beobachtet werden. Während bei Nävuszellen und Primärmelanomen AP-2alpha vermehrt im Kern nachweisbar war (aktivierte Form), fand sich das AP-2alpha Protein im malignen Melanom und insbesondere in metastatischen Zellen vorwiegend im Zytoplasma. In metastatischen Melanomzellen war AP-2alpha nahezu nicht mehr nachweisbar. Daraus kann man schlußfolgern, dass AP-2alpha im Verlauf der Tumorprogression des Melanoms herunterreguliert und deaktiviert wird. Die Ergebnisse zeigten eine negative Korrelation zwischen der Progression des malignen Melanoms und der Expression von AP-2alpha Protein in vivo auf.

The transcription factor AP-2alpha plays a pivotal role in regulating the expression of several genes whose products are involved in tumor growth and progression of malignant melanoma. In this study the expression of AP-2alpha was analysed in tumorprogression of malignant melanoma. The expression of AP-2alpha was analysed in cell lines, which are established of normal melanocytes to nevi, radial growth phase and subsequently vertical growth phase, to metastatic melanoma, any other tumorcellines and normal skin. On the other hand the expression of AP-2alpha was observed on several levels, that means on DNA-, RNA- and protein levels. Therefore the PCR, the northern blotting, the western blotting and immunhistological method in combination with the laser confocal scanning microskopy is used. A significant loss of the AP-2alpha expression during the progression of malignant melanoma could be demonstrated in situ with immunhistological methods and confocal laserscanning microscopy. AP-2alpha protein has recently been observed in several localizations. AP-2alpha protein within nevuscells and primary melanoma cells was detected in the nucleus (activated form), on the other hand the AP-2alpha protein within the malignant melanoma and especially in metastatic cells was expressed primarly in the cytoplasma. In metastatic melanoma cells the AP-2alpha protein could not be found wether nuclear or cytoplasmatic expression. Therefore this observations lead to the result, that the AP-2alpha protein is down regulated and deactivated during the tumor progression of the melanoma. The results show a negative correlation between the progression of the malignant melanoma and the expression of the AP-2alpha protein in vivo.